在液相色譜儀分析系統(tǒng)中有等度洗脫和梯度洗脫兩種方式。等度洗脫是指實驗過程中（做樣過程）從頭到尾只用一種流動相。也就是只用一個泵，輸送同一種流動相。梯度洗脫是指在同一個分析周期中隨著時間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成分、離子強度、溶液極性等)或pH，以期將層析柱上不同的組分洗脫出來的方法。從而可以使一個復雜樣品中性質(zhì)（極性）差異較大的組分能按各自適宜的容量因 子k達到良好的分離目的。梯度洗脫一般分為二元高壓梯度，二元低壓梯度和四元低壓梯度；二元高壓梯度需要兩臺高壓泵，二元低壓梯度和四元低壓梯度都是只需要一臺高壓泵和一個比列閥。
兩種溶劑組成的梯度洗脫可按任意程度混合，即有多種洗脫曲線：線性梯度、凹形梯度、凸形梯度和階梯形梯度。線性梯度較常用，尤其適合于在反相柱上進行梯度洗脫。
在進行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：
①要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相，有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍就不互溶，使用時更要引起注意。當有機溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。
②梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時產(chǎn)生氣泡。
③混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘主度都較小，當二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水流動相時的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的較大壓力。
④每次梯度洗脫之后必須對色譜柱進行再生處理，使其恢復到初始流動相流經(jīng)色譜柱，使固定相與初始流動相達到完全平衡。
